Este medio fue desarrollado originalmente para el cultivo de puntas de brotes de Mt. Laurel. Desde entonces, el medio se ha convertido en un estándar para el cultivo de muchas especies de plantas leñosas. El nitrato de potasio se eliminó de este medio y se reemplazó con sulfato de potasio.
Especies de plantas: Kalmia latifolia (Laurel de montaña), Rhododendron spp.
Los niveles de nitrato de amonio son ¼ X en comparación con MS. El nitrógeno también es
proporcionado por nitrato de calcio.
INFORMACION DEL PRODUCTO
Solubilidad: Agua
Forma física: Sólido blanco a amarillo
Gramos de polvo para preparar 1 Litro: 2,41gr
PH: 3,5-6,0
Otras notas: Probado en cultivo de tejidos
PROCEDIMIENTO DE USO
Adicionar 2,41gr de Medio basal de plantas leñosas de Lloyd & McCown con vitaminas por cada litro de medio sólido o liquido a preparar junto a los demás ingredientes según la fórmula que siga recomendada.
Idealmente se utilizan para un medio solido 2,41gr de Medio basal de plantas leñosas de Lloyd & McCown con vitaminas por litro, de 20 gr a 30 gr por litro de sacarosa, 8 gr por litro de agar y puede adicionarse alguna hormona QUE NO SEA TERMOLABIL. Todos los ingredientes en agua destilada o tratada por ósmosis inversa.
Llevar a ebullición la mezcla y mantener 5 minutos revolviendo periódicamente o usando agitador magnético. Dejar entibiar, servir en los frascos de cultivo y esterilizar en autoclave.
Dos métodos (esterilización en autoclave y filtración por membrana a presión positiva) se utilizan comúnmente para esterilizar los medios de cultivo. Los medios de cultivo, el agua destilada y otras mezclas estables se pueden esterilizar en autoclave en recipientes de vidrio sellados con tapones de algodón, papel de aluminio o cierres de plástico. Sin embargo, las soluciones que contienen componentes termolábiles deben esterilizarse por filtración.
Generalmente, los medios de cultivo de tejidos vegetales o nutrientes se esterilizan en autoclave a 1,05 kg / cm2 (15 psi) y 121 ° C. Las altas temperaturas no solo matan bacterias y hongos, sino también sus esporas resistentes al calor. Los medios pueden ser esterilizados en autoclave u olla a presión con resultados similares. El tiempo necesario para la esterilización depende del volumen de medio en el recipiente. Para pequeños volúmenes de líquidos (100 ml o menos), el tiempo necesario para esterilizar en autoclave es de 15-20 min, pero para cantidades mayores (2-4 litros), se requieren 30-40 min. La presión no debe exceder los 20 psi, ya que las presiones más altas pueden provocar la descomposición de los carbohidratos y otros componentes termolábiles de un medio. Existe evidencia de que el medio expuesto a temperaturas superiores a 121 ° C pueden no gelificar adecuadamente o pueden provocar un crecimiento celular deficiente. Los tiempos necesarios para la esterilización de diferentes volúmenes de medio se enumeran a continuación. Dado que muchas proteínas, vitaminas, aminoácidos, extractos de plantas, hormonas y carbohidratos son termolábil y puede descomponerse durante la esterilización en autoclave, puede ser necesaria la esterilización por filtro. La porosidad de la membrana del filtro no debe tener más de 0,2 micrones (µm). Cristalería vacía que va a contener los medios debe esterilizarse en autoclave antes de la esterilización por filtración.
Los medios nutritivos que contienen componentes termolábiles se pueden preparar en varios pasos. Eso es la solución de los componentes termoestables se esteriliza de la forma habitual en autoclave y luego se enfría a 35 - 50 ° C en condiciones estériles; en una operación separada, las soluciones de los componentes termolábiles son esterilizado por filtro. Las soluciones esterilizadas se combinan luego en condiciones asépticas para dar la mezcla completa del medio de cultivo.
NOTA: El tiempo mínimo de esterilización en autoclave incluye el tiempo necesario para que el volumen de líquido alcance la temperatura de esterilización (121 ° C) y 15 min a 121 ° C (Burger, 1988). Los tiempos pueden variar debido a diferencias en autoclaves. Se recomienda la validación con su sistema.
